Ien fan 'e wichtichste foardielen fan selkultuer is de mooglikheid om de fysike chemie fan selreproduksje te manipulearjen (dus temperatuer, pH, osmotyske druk, O2- en CO2-spanning) en fysiologyske omjouwing (dws hormoan- en fiedingskonsintraasje).Neist temperatuer wurdt de kultueromjouwing regele troch it groeimedium.
Hoewol de fysiologyske omjouwing fan kultuer net sa dúdlik is as har fysike en gemyske omjouwing, in better begryp fan serumkomponinten, identifikaasje fan groeifaktoaren dy't nedich binne foar proliferaasje, en in better begryp fan 'e mikroomjouwing fan sellen yn kultuer.(Ie sel-sel-ynteraksje, gasdiffusie, ynteraksje mei de matrix) lit no bepaalde sellenlinen yn serumfrije media kweekje.
1.Culture omjouwing beynfloedet sel groei
Tink derom dat de selkultuerbetingsten ferskillend binne foar elk seltype.
De gefolgen fan ôfwiking fan de kultuerbetingsten dy't nedich binne foar in bepaald seltype fariearje fan 'e ekspresje fan abnormale fenotypen oant it folsleine mislearjen fan selkultuer.Dêrom riede wy oan dat jo bekend wurde mei de selline wêryn jo ynteressearre binne en de ynstruksjes strikt folgje foar elk produkt dat jo brûke yn jo eksperimint.
2. Foarsoarchsmaatregels foar it meitsjen fan in optimalisearre selkultueromjouwing foar jo sellen:
Kultuermedia en serum (sjoch hjirûnder foar mear ynformaasje)
pH- en CO2-nivo's (sjoch hjirûnder foar mear ynformaasje)
Kultivearje plestik (sjoch hjirûnder foar mear ynformaasje)
Temperatuer (sjoch hjirûnder foar mear ynformaasje)
2.1 Kulturele media en serum
It kultuermedium is it wichtichste diel fan 'e kultueromjouwing, om't it de fiedingsstoffen, groeifaktoaren en hormonen leveret dy't nedich binne foar selgroei, en regelet de pH en osmotyske druk fan 'e kultuer.
Hoewol de earste selkultuereksperiminten waarden útfierd mei natuerlike media krigen fan tissue-ekstrakten en lichemsfloeistoffen, late de needsaak foar standerdisearring, mediakwaliteit en ferhege fraach ta de ûntwikkeling fan definitive media.De trije basistypen media binne basale media, redusearre serummedia en serumfrije media, en se hawwe ferskillende easken foar serumsupplementaasje.
2.1.1 Basis medium
Gibco sel kultuer medium
De measte sellenlinen groeie goed yn basismedia mei aminosoeren, vitaminen, anorganyske sâlten en koalstofboarnen (lykas glukoaze), mar dizze basismediaformuleringen moatte wurde oanfolle mei serum.
2.1.2 Redusearre serum medium
Fleske mei Gibco Low Serum Medium
In oare strategy om de neidielige effekten fan serum yn selkultuer eksperiminten te ferminderjen is it brûken fan serum-fermindere media.Reduced serum medium is in basis medium formule ryk oan fiedingsstoffen en dier-ôflaat faktoaren, dat kin ferminderjen it bedrach fan nedich serum.
2.1.3 Serumfrij medium
Fleske mei Gibco serumfrij medium
Serumfrij medium (SFM) omgiet it gebrûk fan dierserum troch serum te ferfangen troch passende fiedings- en hormoanformuleringen.In protte primêre kultueren en sellinen hawwe serumfrije mediumformuleringen, ynklusyf de Sineeske Hamster Ovary (CHO) rekombinante proteïneproduksjeline, ferskate hybridoma-sellinen, ynsektenlinen Sf9 en Sf21 (Spodoptera frugiperda), lykas ek foar De host foar firusproduksje. (Bygelyks, 293, VERO, MDCK, MDBK), ensfh Ien fan de wichtichste foardielen fan it brûken fan in serum-frij medium is de mooglikheid om te meitsje it medium selektyf foar spesifike sel soarten troch in selektearje in passende kombinaasje fan groei faktoaren.De folgjende tabel jout de foardielen en neidielen fan serumfrije media.
Foardiel
Fergrutsje dúdlikens
Mear konsekwint prestaasjes
Makliker suvering en streamôfwerts ferwurking
Sekuer beoardielje sel funksje
Ferheegje de produktiviteit
Better kontrôle fan fysiologyske reaksjes
Ferbettere selmediadeteksje
Neidiel
Sel type spesifike medium formule easken
Hegere suverens fan reagens nedich
Fertraging yn groei
2.2.1 pH nivo
De measte normale sellen fan sûchdieren groeie goed by pH 7,4, en de ferskillen tusken ferskate sellen binne lyts.Guon transformearre sellenlinen binne lykwols oantoand dat se better groeie yn in wat soere omjouwing (pH 7.0 - 7.4), wylst guon normale fibroblast-sellinen in wat alkaline omjouwing (pH 7.4 - 7.7) leaver hawwe.Sellinen fan ynsekten lykas Sf9 en Sf21 groeie it bêste by pH 6.2.
2.2.2 CO2 nivo
It groeimedium kontrolearret de pH fan 'e kultuer en buffert de sellen yn' e kultuer om feroaringen yn pH te wjerstean.Meastentiids wurdt dizze buffering berikt troch organyske (bygelyks HEPES) of CO2-bicarbonate-basearre buffers te befetsjen.Om't de pH fan it medium hinget ôf fan it delikate lykwicht fan oplost koaldiokside (CO2) en bikarbonat (HCO3-), sille feroaringen yn atmosfearyske CO2 de pH fan it medium feroarje.Dêrom, by it brûken fan in medium buffered mei in CO2-bicarbonate-basearre buffer, is it nedich om exogenous CO2 te brûken, benammen by it kultivearjen fan sellen yn iepen kultuergerjochten of it kultivearjen fan transformearre sellenlinen by hege konsintraasjes.Hoewol de measte ûndersikers gewoanlik 5-7% CO2 yn 'e loft brûke, brûke de measte selkultuer eksperiminten gewoanlik 4-10% CO2.Elk medium hat lykwols in oanrikkemandearre CO2-spanning en bikarbonatkonsintraasje om de juste pH en osmotyske druk te berikken;foar mear ynformaasje, nim dan ferwize nei it medium fabrikant syn ynstruksjes.
2.3 Kultivearjen fan keunststof
Selkultuerplestik binne te krijen yn in ferskaat oan foarmen, maten en oerflakken om te passen by ferskate selkultuerapplikaasjes.Brûk de plestik oerflakgids foar selkultuer en hantlieding foar selkultuerkontainer hjirûnder om jo te helpen it juste plestik te kiezen foar jo applikaasje foar selkultuer.
Besjoch alle Thermo Scientific Nunc-selkultuerplestik (advertinsjekeppeling)
2.4 Temperatuer
De optimale temperatuer foar selkultuer hinget foar in grut part ôf fan 'e lichemstemperatuer fan 'e gasthear dêr't de sellen út isolearre binne, en yn mindere mjitte fan 'e anatomyske feroarings yn temperatuer (bgl. hûdtemperatuer kin leger wêze as dy fan skeletspieren ).Foar selkultuer is Oververhitting in serieuzer probleem dan oververhitting.Dêrom wurdt de temperatuer yn 'e ynkubator gewoanlik in bytsje ûnder de optimale temperatuer ynsteld.
2.4.1 Optimale temperatuer foar ferskate sellen
De measte sellen fan minsklike en sûchdieren wurde hâlden op 36 ° C oant 37 ° C foar optimale groei.
Ynsektensellen wurde kultivearre op 27 ° C foar optimale groei;se groeie stadiger by legere temperatueren en temperatueren tusken 27 °C en 30 °C.Boppe 30 ° C nimt de fitaliteit fan ynsektensellen ôf, sels as it weromkomt nei 27 ° C, sille de sellen net werhelje.
Avian-sellinen hawwe 38,5 ° C nedich om maksimale groei te berikken.Hoewol dizze sellen op 37 ° C bewarre wurde kinne, sille se stadiger groeie.
Sellinen dy't ôfkomstich binne fan kâldbloedige bisten (lykas amfibyen, kâldwetterfisken) kinne in breed temperatuerberik fan 15 °C oant 26 °C ferneare.
Post tiid: Feb-01-2023