Fersmoarging fan selkultueren kin maklik it meast foarkommende probleem wurde yn selkultuerlaboratoaren, wat soms heul serieuze gefolgen hat.Selskultuerkontaminanten kinne wurde ferdield yn twa kategoryen, gemyske kontaminanten lykas medium-, serum- en wetterûnzuiverheden, endotoxinen, plasticizers en detergenten, en biologyske kontaminanten lykas baktearjes, skimmels, gisten, firussen, krúsynfeksje fan mycoplasmas.Fersmoarge troch oare sellen.Hoewol it ûnmooglik is om kontaminaasje folslein te eliminearjen, kinne de frekwinsje en hurdens dêrfan wurde fermindere troch de boarne goed te begripen en goede aseptyske techniken te folgjen
1. Dizze seksje beskriuwt de haadtypen fan biologyske fersmoarging:
Baktearjele fersmoarging
Skimmel en firus fersmoarging
Mycoplasma fersmoarging
Gist fersmoarging
1.1 Baktearjele fersmoarging
Baktearjes binne in grutte groep ubiquitous iensellige mikroorganismen.Se binne meastentiids mar in pear mikron yn diameter en kinne komme yn in ferskaat oan foarmen, fan sfearen oan roeden en spiralen.Fanwegen har ubiquity, grutte en rappe groeisnelheid binne baktearjes, tegearre mei gisten en skimmels, de meast foarkommende biologyske kontaminanten yn selkultuer.
1.1.1 Deteksje fan baktearjele fersmoarging
Baktearjele fersmoarging wurdt maklik ûntdutsen troch fisuele ynspeksje fan 'e kultuer binnen in pear dagen nei't it ynfektearre is;
Ynfekteare kultueren ferskine meast bewolkt (dus troebel), soms mei in tinne film op it oerflak.
Ynienen drippen yn de pH fan it kultuermedium wurdt ek faak tsjinkaam.
Under in mikroskoop mei leech krêft ferskine de baktearjes as lytse, bewegende korrels tusken de sellen, en observaasje ûnder in mikroskoop mei hege krêft kin de foarmen fan yndividuele baktearjes oplosse.
1.2 Schimmel- en firuskontaminaasje
1.2.1 Mold fersmoarging
Skimmels binne eukaryote mikroorganismen fan it skimmelryk dy't groeie yn 'e foarm fan mearsellige filaminten neamd hyfen.De ferbinende netwurken fan dizze mearsellige filaminten befetsje genetysk identike kearnen neamd koloanjes of mycelium.
Fergelykber mei gistkontaminaasje bliuwt de pH fan 'e kultuer stabyl yn' e earste faze fan fersmoarging en nimt dan rap ta as de kultuer sterker ynfekteare wurdt en bewolkt wurdt.Under de mikroskoop is mycelium meastentiids filamentous, soms as tichte klusters fan sporen.De sporen fan in protte skimmels kinne oerlibje yn ekstreem hurde en ûngastfrije omjouwings yn har sliepende faze en wurde allinich aktivearre as de juste groeibetingsten wurde tsjinkaam.
1.2.2 Firus fersmoarging
Firussen binne mikroskopyske ynfeksjeare aginten dy't de masinery fan 'e hostsel oernimme foar reproduksje.Har ekstreem lytse grutte makket se lestich te ûntdekken yn kultuer en te ferwiderjen fan reagentia dy't brûkt wurde yn selkultuerlaboratoaren.Om't de measte firussen tige strange easken stelle foar har hosts, hawwe se meastal gjin negatyf ynfloed op selkultueren fan oare soarten as de gasthear.
It gebrûk fan firus-ynfekteare selkultueren kin lykwols in serieus risiko foarmje foar de sûnens fan laboratoariumpersoniel, foaral as minsklike of primatensellen yn it laboratoarium groeid wurde.
Virale ynfeksje yn selkultueren kin ûntdutsen wurde troch elektroanenmikroskopie, immunokleuring mei in set fan antykladen, ELISA, of PCR mei passende virale primers.
1.3 Mycoplasma fersmoarging
Mycoplasmas binne ienfâldige baktearjes sûnder selwanden, en se wurde tocht dat se de lytste sels-replikearjende organismen binne.Troch har ekstreem lytse grutte (meastentiids minder as 1 mikron) is mykoplasma dreech te ûntdekken oant se ekstreem hege tichtheden berikke en selkultueren feroarsaakje;Oant dan is d'r normaal gjin dúdlik teken fan ynfeksje.
1.3.1 Deteksje fan mycoplasma fersmoarging
Guon stadich groeiende mycoplasma's kinne yn kultueren oanhâlde sûnder selsdea te feroarsaakjen, mar se feroarje it gedrach en metabolisme fan hostsellen yn kultueren.
Kronyske mycoplasma-ynfeksje kin wurde karakterisearre troch fermindere selproliferaasjerate, fermindere sêdingstichtens en agglutinaasje yn suspensjekultuer.
De iennichste betroubere manier om mycoplasma-kontaminaasje te detektearjen is lykwols de kultuer regelmjittich te testen mei fluorescent kleuring (bgl. Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunokleuring, autoradiografy, of mikrobiale testen.
1.4 Yeast fersmoarging
Gisten binne iensellige eukaryoten fan it skimmelryk, fariearjend yn grutte fan in pear mikron (meastentiids) oant 40 mikron (selden).
1.4.1 Deteksje fan gistkontaminaasje
Lykas by baktearjende fersmoarging kinne kultueren besmet mei gist bewolkt wurde, benammen as de fersmoarging yn in avansearre stadium is.De pH fan kultueren dy't besmet binne mei gist feroaret hiel lyts oant de fersmoarging hurder wurdt, op hokker stadium de pH meastal ferheget.Under de mikroskoop ferskynt gist as yndividuele ovoid as sfearyske dieltsjes en kin lytsere dieltsjes produsearje.
2.Cross ynfeksje
Hoewol net sa gewoan as mikrobiële kontaminaasje, is wiidweidige krúskontaminaasje fan in protte sellenlinen mei HeLa en oare snelgroeiende sellenlinen in dúdlik definieare probleem mei serieuze gefolgen.Krij sellinen fan renommearre selbanken, kontrolearje regelmjittich de skaaimerken fan 'e sellinen, en brûk goede aseptyske techniken.Dizze praktiken sille jo helpe om krúskontaminaasje te foarkommen.DNA-fingerprinting, karyotyping en isotyping kinne befestigje oft der krúskontaminaasje is yn jo selkultuer.
Hoewol net sa gewoan as mikrobiële kontaminaasje, is wiidweidige krúskontaminaasje fan in protte sellenlinen mei HeLa en oare snelgroeiende sellenlinen in dúdlik definieare probleem mei serieuze gefolgen.Krij sellinen fan renommearre selbanken, kontrolearje regelmjittich de skaaimerken fan 'e sellinen, en brûk goede aseptyske techniken.Dizze praktiken sille jo helpe om krúskontaminaasje te foarkommen.DNA-fingerprinting, karyotyping en isotyping kinne befestigje oft der krúskontaminaasje is yn jo selkultuer.
Post tiid: Feb-01-2023